Слайд 1Учение об инфекции. Патогенность и вирулентность микроорганизмов. Биологические методы исследования.
Практическое занятие
№1
Раздел: учение об инфекции
2 курс, 3 семестр
Слайд 2Цель занятия:
Закрепить знания о роли макроорганизма в возникновении и течении инфекционного
процесса.
Слайд 3Задачи занятия:
Изучить что такое инфекционный процесс;
Изучить в чем заключается вирулентность и
патогенность микроорганизмов;
Изучить роль макроорганизма в развитии инфекционного процесса;
Изучить динамику развития инфекционного процесса;
Изучить методы микробиологической диагностики.
Слайд 4Актуальность темы:
Инфекционные болезни были известны давно. Народы глубокой древности не могли
иметь правильного представления о причинах возникновения и течения этих заболеваний и считали их «карой божьей».
Еще в 17веке Гиппократ и другие его последователи, считали ,что заразные болезни связаны с какими-то существами, передающимися от больных к здоровым.
В средине 19 века Луи Пастер, Р.Кох, И.И. Мечников, Д.И. Ивановский установили, что возбудителями инфекционных болезней являются микроорганизмы!!!
Слайд 6Ответьте на вопросы:
Что такое инфекционный процесс?
Слайд 7Ответ:
Инфекционный процесс (от латинского infectio – заражать, загрязнять) – это совокупность
явлений, возникающих и развивающихся в макроорганизме при внедрении и размножении в нем болезнетворных микроорганизмов.
Слайд 8От чего зависят проявления инфекции?
Слайд 9Ответ:
От свойств микроорганизма;
От состояния макроорганизма (пол, возраст, состояние ЦНС, ССС, эндокринной
системы, питания);
От условий внешней (охлаждение, перегревание, радиация, условия труда и жизни) и внутренней среды (состояния нормальной микрофлоры);
От взаимоотношений между макро- и микроорганизмом.
Слайд 10Как называется взаимодействие между макро- и микрорганизмом? В чем оно проявляется.
В каких связях?
Слайд 11Ответ:
Взаимодействие между макро- и микроорганизмом – симбиоз.
Симбиоз характеризуется:
Мутализм (взаимный) – выгодное
сожительство для обоих сожителей;
Компенсализм (сожитель, сотрапезник) – это форма сожительства при которой один сожитель (микрорганизм), живет за счет хозяина (макро-), не принося ему вреда.
Паразитизм (нахлебник) – когда один организм (паразит) живет за счет другого (хозяина) не принося ему вреда.
Слайд 12Как называется способность микроорганизмов вызывать патологические процессы (заболевания)?
Слайд 13Ответ:
Патогенность (pathos – страдание, genos - рождение) – это способность микрорганизмов
вызывать патологические процессы (заболевание).
Слайд 14Как называются микроорганизмы обладающие такой способностью?
Слайд 15Ответ:
патогенными микроорганизмами
Слайд 16Чем обусловлена патогенность микроорганизмов?
Слайд 17Ответ:
Наличием капсулы;
Жгутиков;
Спор;
Подвижности;
Выработка токсинов и ферментов
Слайд 18Что такое вирулентность патогенных микроорганизмов?
Слайд 19Ответ:
Вирулентность – это свойство микрооганизмов, которое может меняться и зависит
от ряда свойств микроорганизмов.
Вирулентность – это свойство бактерий, объясняющее их патогенность.
Слайд 20Чем обусловлена вирулентность микроорганизмов?
Слайд 21Ответ:
Их способностью к прилипанию (адгезия);
Размножению (колонизация);
Способностью к проникновению в ткани
и клетки (инвазия);
Способности подавлять фагоцитоз клеток;
Способность синтезировать токсины (яды) токсинообразование.
Слайд 22Как делятся штаммы одного и того же вида микроорганизма по вирулентности?
Слайд 23Ответ:
Умеренновирулентные
Высоковирулентные
Слабовирулентные
Авирулентные
Слайд 24На какие группы делятся токсины, образуемые микроорганизмами?
Слайд 25Ответ:
Токсины, делятся на 2 группы: экзотоксины и эндотоксины
Слайд 26Охарактеризуйте свойства экзотоксинов?
Слайд 27Ответ:
Являются продуктами метаболизма микробов, секретируются во внешнюю среду;
Имеют белковое происхождение;
Мало устойчивы
к внешним воздействиям (тепло, холод, влажность);
Они высокотоксичные и специфичные (каждый вид токсина поражает определенные органы или ткани);
Под действием формалина переходят в анатоксин;
Образуются в грам (+) бактериях.
Слайд 28Охарактеризуйте свойства эндотоксинов?
Слайд 29Ответ:
Это липополисахариднопротеиновый комплекс;
Тесно связаны с клеткой, за счет этого обуславливает
устойчивость микроорганизма к температурному фактору;
Не специфичны;
Клиническая картина вызванная эндотоксинами, однотипна (интоксикация, лихорадка, головная боль);
Чтобы получить эндотоксин необходимо разрушить клетку!
Под действием формалина частично обезвреживаются;
Образуются в грам (-) бактериях.
Слайд 30
Как определить действие токсина?
Слайд 31Ответ:
На лабораторных животных чувствительных к этому токсину (дифтерийный токсин- морские
свинки; ботулинический токсин – белые мыши).
Слайд 32Какие используют обозначения для определения силы вирулентности и силы токсина микроорганизмов?
Слайд 33Ответ:
Используют условные буквенные обозначения:
DLM (dosis letalis minima) – наименьшая доза микробов
или токсина, которая убивает большинство подопытных животных;
DCL (dosis certe letalis) – наименьшая доза микробов или токсина, которая убивает всех животных взятых в опыт;
LD50 (dosis letalis) – доза микробов или токсина, которая приводит к гибели 50% подопытных животных.
Слайд 34Кто может являться источником инфекции?
Слайд 35Ответ:
Больной человек (выздоравливающие –называются «реконволисценты», со скрытой формой заболевания, носители);
Животные.
Слайд 36Ответьте на вопрос:
Назовите механизмы передачи возбудителей инфекций?
Слайд 37Ответ:
Существует 4 типа механизма передачи инфекции:
Фекально-оральный (с пищей, водой, возбудители локализуются
в кишечнике);
Воздушно-капельный, воздушно-пылевой (поражают органы дыхания);
Трансмиссивный (передаются через кровососущих насекомых, поражают кровеносную систему);
Контактный путь: возбудитель локализуется на поверхности (кожа, слизистые) а) прямой – от больного к здоровому; б) не прямой – через предметы обихода (поражают кожу, слизистые оболочки).
Слайд 38Ответьте на вопрос:
Что такое «входные ворота» и «критическая доза» при развитии
инфекционного процесса?
Слайд 39Ответ:
«Входные ворота» – это те органы и ткани организма хозяина,
через которые приникают патогенные микроорганизмы.
«Критическая доза» – это та доза, в которой проникли микроорганизмы в организм хозяина и вызвали возникновение инфекционного процесса.
Слайд 40Ответьте на вопрос:
Какие существуют формы инфекционного процесса?
Слайд 41Ответ:
В зависимости от пути проникновения возбудителя: экзогенные и эндогенные (аутоинфекции);
По продолжительности
течения: острые (1нед-1мес), хронические (месяц и много лет);
По количеству возбудителей: моноинфекция (1 возб.), смешанная инфекция (2-3 разных возбудителя),
По кратности заражения: вторичная инфекция – к основному заболевания присоединяется инфекция, вызванная другим возбудителем), реинфекция –состояние когда возникло повторное заболевание, вызванное одним и тем же возбудителем, суперинфекция – инфекция возникла до выздоровления, тем же возбудителем, рецедив – возврат симптомов заболевания, которые возникают без повторного заражения возбудителем.
Слайд 42Ответ:
Латентная форма инфекционного процесса – болезнь протекает скрыто, без клинических
проявлений;
Микробоносительство – клиническое выздоровление, но возбудители остаются еще в организме;
От локализации инфекционного процесса:
А) очаговая инфекция – микробы находятся в местном очаге, не распространяясь за его пределы;
Б) генерализованная инфекция – возбудители распространяются по всему организму.
Слайд 43На какие виды делятся инфекции по циркуляции микроорганизмов в кровотоке?
Слайд 44Ответ:
Бактериемия – состояние, когда возбудители инфекции циркулируют в течение определенного
времени в крови, но не размножаются в ней;
Септицемия – возбудитель длительно находится в крови, накапливается там и даже размножается, возникает сепсис или спетицемия.;
Вирусемия – циркуляция вируса в крови;
Токсинемия – циркуляция токсина в крови;
Септикопиемия – гнойничковой поражение различных органов.
Слайд 45Какие существуют типы инфекций в зависимости от источника инфекции?
Слайд 46Ответ:
Антропонозы – источником инфекции является человек;
Зоонозы – источником является животное, но
болеют и люди и животные;
Сапронозы – источником инфекции служат бактерии, грибы, споры попавшие с объектов внешней среды в организм человека (рану, кожу)
Слайд 47Ответьте на вопрос:
Какая существует динамика развития инфекционного процесса?
Слайд 48Ответ:
Инкубационный период – время от момента внедрения микроорганизма до появления
первых признаков заболевания;
Продромальный период – период предвестников после инкубационного периода и проявляется общими симптомами при разных заболеваниях;
Период развития основных клинических проявлений – развитие разнообразных специфических симптомов заболевания;
Период выздоровления – (реконвалисценция) угасание симптомов, нормализация физиологических функций.
Слайд 49Этапы распространения инфекционных заболеваний?
Слайд 50Ответ:
Эпидемия – массовые заболевания, связанные друг с другом;
Пандемия – массовые
заболевания, распространяющиеся на несколько стран и континентов;
Спорадические заболевания – инфекционные заболевания, встречающиеся в единичных случаях;
Эндемия – заболевания, распространенные только в определенной местности.
Слайд 51Таким образом, объект изучения медицинских микробиологических лабораторий —
патогенные биологические агенты
(ПБА) — патогенные для человека микроорганизмы (вирусы, бактерии, грибы, простейшие)
генно-инженерно модифицированные микроорганизмы
яды биологического происхождения (токсины)
Гельминты
материал, подозрительный на содержание ПБА (включая кровь, биологические жидкости и экскременты организма человека)
Слайд 52Микробиологические лаборатории
диагностические
производственные
научно-исследовательские.
В соответствии с типами микроорганизмов, изучаемых
в них выделяют:
бактериологические,
вирусологические,
микологические и
протозоологические лаборатории.
Слайд 53
Лаборатории разных групп риска
В зависимости от уровня безопасности работы с микроорганизмами лаборатории подразделяют на четыре группы риска.
Первая группа риска: лаборатории особого режима (максимально изолированные) с высоким индивидуальным и общественным риском.
Вторая группа риска: режимные лаборатории (изолированные) с высоким индивидуальным и низким общественным риском.
Третья группа риска: базовые (основные) лаборатории с умеренным индивидуальным и ограниченным общественным риском.
Четвёртая группа риска: базовые (основные) лаборатории с низким индивидуальным и общественным риском.
Слайд 54
Группы возбудителей инфекционных заболеваний
Регламентация условий работы с возбудителями инфекционных заболеваний произведена
в соответствии со степенью опасности микроорганизмов для человека. По этому признаку выделено четыре группы возбудителей.
Группа I: возбудители особо опасных инфекций: чума, натуральная оспа, лихорадки Ласса, Эбола и др.
Группа II: возбудители высококонтагиозных бактериальных грибковых и вирусных инфекций: сибирская язва, холера, лихорадка Скалистых гор, сыпной тиф, кокцидиоидомикоз, бластомикоз, бешенство и др. В эту группу также включён ботулотоксин (но не сам возбудитель ботулизма).
Группа III: возбудители бактериальных грибковых, вирусных и протозойных инфекций, выделенных в отдельные нозологические формы (возбудители коклюша, столбняка, ботулизма, туберкулёза, кандидоза, малярии, лейшманиоза, гриппа, полиомиелита и др.). В эту группу также включены аттенуированные штаммы бактерий групп I, II и III.
Группа IV: возбудители бактериальных, вирусных, грибковых септицемии, менингитов, пневмоний, энтеритов, токсикоинфекций и острых отравлений (возбудители анаэробных газовых инфекций, синегнойной инфекции, аспергиллёза, амебиаза, аденовирусы, герпесвирусы и др.).
Слайд 55ПРИНЦИПЫ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКИ ИНФЕКЦИОННЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ
Слайд 56Методы микробиологической диагностики
Слайд 57Биологические методы исследования – это?
Методы исследования, проводимые на лабораторных животных.
Цель этих
исследований: выделение микроорганизмов из исследуемого материала.
В каких случаях проводится?
Когда возбудитель не обнаруживается при посеве материала;
Когда выделение чистой культуры из материала загрязнено другими микроорганизмами и при этом никакой из возбудителей не размножается на искусственной питательной среде;
Когда необходимо определить свойства вирулентности микрорганизмов.
Слайд 58Иначе говоря, биологические методы в микробиологии - это
Экспериментальное заражение лабораторных животных.
Оно
позволяет:
Воспроизвести реальную картину инфекционного процесса (болезни);
Изучить реакции иммунитета;
Изучить эффективность иммунологических препаратов.
Слайд 59При выборе лабораторного животного необходимо учитывать:
Степень его восприимчивости к изучаемой инфекции;
Установить,
не вызывает ли у него данный возбудитель заболевание в естественных природных условиях.
Слайд 60Виды лабораторных животных
Для экспериментального заражения чаще используются: белые мыши, крысы, морские
свинки и кролики.
Для специальных исследований используют: обезьян, лошади, кошки, собаки, мелкий рогатый скот и дикие животные (суслики, полевки и дикие крысы); птицы (куры, голуби и т.д.)
Слайд 61Особенности лабораторных животных:
Чистолинейные (инбредные) животные – т.е. те, что получены при
близкородственном скрещивании (братья, сестры) в течение 20-40 поколений с отбором животных по определенному признаку.
Почему именно инбредные животные? чистота породы позволяет получить однообразие ответных реакций при заражении и сократить число исследований (опытов).
Слайд 62Гнотобиология – это ?
Наука, изучающая безмикробную жизнь макрорганизмов.
Цель науки: выявить роль
нормальной микрофлоры в физиологических и патологических процессах макроорганизма.
Для этого используют: безмикробных животных (их содержат в спец.лабораториях, в стерильных условиях).
Слайд 63Содержание лабораторных животных:
Содержатся в особых условиях (вивариях): в клетках, установленных на
стелажах;
Каждый вид лабораторного животного содержат отдельно;
Помещение вивария должно быть: светлым, теплым, сухим, приближено к естественным условиям;
В виварии должно быть: помещение карантийное, для содержания здоровых животных, для вскрытий, кухня для приготовления пищи животным.
Слайд 65Уход за лабораторными животными:
Осмотр и наблюдение каждодневное , отмечать любое изменение
в поведении и отсутствии аппетита;
Для уборки вивария необходимо иметь фартук, перчатки, косынку, сменную обувь, нарукавники, маску, очки, резиновые сапоги;
Все клетки необходимо очищать от мусора, остатков еды, поильники и миски мыть;
1 раз в неделю клетки необходимо промывать горячей водой.
Слайд 66Уход и спец.одежда работника вивария
Слайд 67Кормление лабораторных животных:
Правильное, полноценное, согласно нормам ( сено, отруби, пшено, зерновые
смеси, продукты животного происхождения и т.д.);
Количество и характер питания зависит от вида животного;
Плохое содержание и кормление сказывается на устойчивости животного к инфекциям!!!
Слайд 69Отбор животных и подготовка их к опыту:
Получать животное для опытов следует
строго из одного и того же питомника!
Для опыта отбирают животных одной породы, веса, возраста и пола;
Перед опытом животное взвешивают и измеряют ежедневно температуру (3,5см, ректально, 5 мин.);
Переносят в клетках и содержат по 5-8шт.;
Далее производят маркировку животных (красят или металлические пластинки) на лапку, голову, спину, холку) и нумеруют клетки.
Слайд 71Экспериментальное заражение животных:
Иммобилизация животных.
Перед опытом нужно животное вынуть из клетки: в
перчатках, за хвостик (мыши, крысы), за спину (кролики и морские свинки);
Затем фиксируют животное – т.е. ограничивают его подвижность (доски, ящики-боксы, пластинки, станки и т.д.);
Слайд 72Способ фиксации зависит от манипуляции ( лежа, сидя, стоя, распяв и
т.д.);
Простые способы фиксации: завернуть туго в полотенце, тряпку, или взять за передние и задние лапки; за уши и голову и т.д.;
Экспериментатор работает всегда с помощником!
Слайд 74Подготовка инструментов для проведения эксперимента:
Стерильный инструмент (шприцы, иглы, пинцеты, скальпель);
Заражать только
нативным материалом (гной, мокрота, кровью, экссудат из органов, взвесь микробов);
Материал для заражения помещают в стерильную посуду, осторожно набирают в шприц, избегая разбрызнгивания.
Используемые инструменты, вату в дез.растворы скидывают.
Слайд 75Способы заражения лабораторного животного:
Перед заражением необходимо:
Операционное поле (участок для заражения) шерсть
необходимо выстричь ножницами с закругленными концами; и выщипать остатки шерсти.
Перед инъекцией операционное поле дезинфицируют спиртом или спиртовым р-ром йода.
Слайд 76Подкожное введение:
Место введения: под кожу спины, живота, или затылка;
В водят под
кожу, у основания в складку;
Вводят медленно;
Место инъекции обрабатывают спиртом, йодом.
Слайд 77Внутрикожное введение:
Туберкулиновым шприцом;
Кожу растягивают пальцами;
Иглу вводят срезом вверх (игла должна просвечиваться
под эпидермисом);
Применяют при аллергических пробах.
Слайд 78Накожный способ введения:
Поверхность кожи скарифицируют;
Исследуемый материал втирают в участок шпателем или
стерильной палочкой;
Животное зафиксировано до тех пор пока материал не высохнет!
Слайд 79Внутримышечное введение:
Материал вводят в толщу мышцы или бедра
Иглу вводят под прямым
углом
Слайд 80Внутрибрюшинное введение:
Животное следует держать вертикально головой вниз;
Иглу вводят под острым углом,
в нижнюю часть живота чуть отступя от срединной линии;
Иглу проталкивают до ощущения «провала».
Слайд 81Внутривенное введение:
Метод зависит от вида животного:
Кролик – ухо.
Мыши и крысы
– хвост.
Морская свинка – в сердце.
Собака – в лапку.
Слайд 82Введение через пищеварительный тракт:
Т.е.перорально
( через рот);
Через зонд, шприц, смешивают с
пищей;
Животное фиксируют вертикально;
Капельно по задней стенки глотки.
Слайд 83Введение через дыхательные пути:
1 способ: закапывание материала через нос шприцем;
2 способ:
закапывание через ноздри пипеткой;
Животное фиксируют брюшком вверх.
Слайд 84Введение в глаз:
1 способ: через коньюктиву закапывают глаз (1-2 капли);
2 способ:
субконьюктивальный – материал вносят тонкой иглой под коньюктиву;
3 способ – в скарифицированный глаз.
Слайд 85Вскрытие и микробиологическое исследование животных:
Умерщвление (гибель)
Животное помещают в банку, опускают вату
смоченную эфиром или хлороформом, через несколько минут животное гибнет;
Декапитация (срезают голову);
Воздушная эмболия (шприцем в ввену воздух).
Вскрытие
Только после гибели животного;
В отдельной комнате для вскрытия;
На спец.столе;
Скрытие протоколируют;
Вскрытие состоит из этапов:
Фиксация, осмотр кожных покровов, вскрытие и исследование грудной полости, вскрытие и исследование брюшной полости.
Слайд 86При вскрытии брюшной полости необходимо:
Сделать мазки отпечатки: для этого стерильным скальпелем
из глубины органа вырезают кусочек органа, часть его опускают в питательную среду, а другую прикладывают к срезом к предметному стеклу и делают мазки
Важно строго соблюдать последовательность мазков-отпечатков, согласно расположению органов в брюшной полости.
Слайд 88Донорство в микробиологии:
Кровь животного применяют в цельном виде, так и для
получения ее отдельных компонентов (сыворотка, плазма, эритроциты), а так же для изучения иммунных свойств после вакцинации животного.
Слайд 89Техника взятия крови у доноров:
Крупные животные ( коровы, лошади, бараны) –
из яремной вены;
Кролик – из уха. Дезинфицируют кожу, вызывают гиперемию. Пощелкивают пальцами по уху, захватывают кончик уха и вводят иглу (без шприца) по ходу вены.
Мыши и крысы – ампутируют кончик хвоста, вытекающую кровь собирают в стерильную пробирку. Культю хвоста приживают перекисью водорода или обжигают пламенем горелки.
Слайд 90Кровопускание в микробиологии:
Одномоментное – взятие крови из сердца животного, кол-во (мл)
зависяит от массы животного;
Тотальное кровопускание (полное обескровливание) – кровь берут из сонной артерии, при этом ее отсепаровывают (выделяют) и свободный конец опускают в сосуд.
Слайд 91Максимальное количество крови, получаемой от лабораторных животных:
Слайд 92Обработка и выделение составных частей крови:
Получение дефибринированной крови: Кровь помещают в
стерильную колбу или баночку со стеклянными бусами и энергично встряхивают в течение 15-20 мин; при этом фибрин оседает на бусах в виде сгустка. Свободную от фибрина кровь переливают в стерильную посуду.
Получение цитратной крови. К крови добавляют вещество, предотвращающее ее свертывание, - 5% раствор натрия цитрата в соотношении 1:10 (на 10 мл крови 1 мл 5% раствора натрия цитрата).
Получение плазмы. Жидкую часть крови получают из цитратной крови, которую центрифугируют или ставят в холодильник на 18-20 ч. В результате над осадком образуется слой жидкости желтоватого цвета - плазма.
Слайд 93Получение взвеси эритроцитов. Взвесь эритроцитов получают из цельной и дефибринированной крови.
Кровь
центрифугируют в течение 15-20 мин при 2000-3000 об/мин. Эритроциты оседают на дно, образовавшуюся над ними желтовато-красную жидкость сливают, а в пробирки добавляют стерильный изотонический раствор натрия хлорида до первоначального объема и вновь центрифугируют. Такое промывание эритроцитов производят 2-3 раза, пока надосадочная жидкость не станет совершенно бесцветной. Последнюю порцию надосадочной жидкости удаляют, а в пробирке остается взвесь эритроцитов, которую можно использовать в течение 2-3 дней. Для сохранения эритроцитов в течение более длительного срока их подвергают обработке формалином. Для получения 50% взвеси к одному объему эритроцитов добавляют два объема буферного раствора, имеющего рН 7,2, и при постоянном помешивании такое же количество 3% раствора формалина. Полученную смесь выдерживают на водяной бане при 37° С 2-3 ч, помешивая ее каждые 15-20 мин, а затем в термостате (всего 20 ч при 37° С). На следующий день смесь центрифугируют в том же растворе, сливают надосадочную жидкость, а осадок доводят до первоначального объема буферным раствором, разливают по флаконам, плотно закрывают и хранят при 4° С.
Слайд 94Домашнее задание: ответьте на вопросы
1. Что означает понятие "биологический метод"?
2. Что
необходимо учитывать при выборе лабораторного животного?
3. Каких животных обычно используют для эксперимента?
4. Каким требованиям должно отвечать помещение вивария? Из каких отделений состоит виварий?
5. Как маркируют лабораторных животных?
6. Для чего фиксируют животных? Какие приспособления для этого существуют?
7. Как следует наполнять шприц, чтобы избежать разбрызгивания материала?
Слайд 958. Что такое операционное поле и как его обрабатывают?
9. Какие способы
заражения животных Вы знаете?
10. От чего зависит количество вводимого животному материала?
11. С какой целью проводят вскрытие лабораторных животных?
12. Из каких этапов состоит вскрытие лабораторных животных?
13. Как готовят мазки и мазки-отпечатки из органов и тканей?
14. Какие правила надо соблюдать при приготовлении отпечатков на одном предметном стекле?
Слайд 9615.Какова техника взятия крови у кроликов, морских свинок, крыс, мышей и
какие из них чаще служат донорами?
16. Что такое тотальное кровопускание?
17. Какие максимальные количества крови можно получить от лабораторных животных при одномоментном и тотальном кровопускании?
18. Как получить нитратную и дефибринированную кровь и составные части крови: плазму, сыворотку, взвесь эритроцитов?
Слайд 97Список литературы:
Ф.К. Черкес, Л.Б. Богоявленская, Н.А. Бельская Микробиология, - «Медицина», Москва,
1985г, - С. 153-180.