Слайд 2Биосенсоры
— это аналитические устройства, в которых чувствительный слой, содержащий биологический материал,
реагирует на присутствие определяемого компонента и генерирует электрический сигнал, функционально связанный с наличием и концентрацией этого вещества.
Биоматериалом могут служить ферменты, ткани, бактерии, дрожжи, антигены/антитела, липосомы, органеллы, рецепторы, ДНК, а также клетки, которые иммобилизованы на физических датчиках
Слайд 3Идея создания такого рода устройств возникла сравнительно недавно, в 1960-х гг.
Впервые ее высказали JI. Кларк и К. Лионе в 1967 г. Идея Кларка состояла в использовании ферментного электрода, т. е. электрохимического датчика с иммобилизованным на его поверхности ферментом. Затем в обиход вошло понятие «биосенсор».
Слайд 4Принципы конструирования биосенсоров. Конструктивно биосенсор представляет собой устройство, состоящее из двух
преобразователей, или трансдьюсеров, — биохимического и физического, находящихся в тесном контакте друг с другом
Слайд 5Разновидности биосенсоров и их применение.
Ферментные биосенсоры могут быть представлены ферментными
электродами, ферментными микрокалориметрическими датчиками, биодатчиками на основе хеми- и биолюминесценции.
Слайд 6Клеточные биосенсоры. Одно из достижений биотехнологии связано с развитием методов включения
живых клеток в полимеры и твердые носители различной природы и применением такого рода материалов для решения задач медицины и управляемого биосинтеза.
Слайд 7Для создания биосенсоров используют различные микроорганизмы: Neigrospora еигореа — для определения
аммиака, Trichosporon brassicae — для определения уксусной кислоты, Sarcina flava — для определения глутамина, Azotobacter vinelaudit — для определения нитратов и др
Слайд 8Биосенсоры можно использовать также для:
измерения пищевой ценности, свежести и безопасности продуктов
питания;
экспресс-анализа крови непосредственно у кровати больного;
обнаружения и измерения степени загрязнения окружающей среды;
детекции и определения количества взрывчатых веществ, токсинов и возможного биологического оружия;
извлечения металлов из сточных вод;
изготовления водородных солнечных элементов;
очистки природных и сточных вод.
Слайд 9Биочипы
Прообразом современных биочипов послужил Саузернблотт, изготовленный в 1975 г. Э. Саузерном.
Он использовал меченую нуклеиновую кислоту для определения специфической последовательности фрагментов ДНК, зафиксированных на твердой подложке. В России ученые начали активно разрабатывать биочипы только в конце 1980-х гг. в Институте молекулярной биологии РАН под руководством А.Д. Мирзабекова.
Слайд 10Биочип и принцип его работы.
Существует несколько разновидностей биочипов — матричные
(с иммобилизованной ДНК), микрофлюидные (капиллярные) и биочипы с использованием микросфер с цветовой кодировкой.
размеры ячеек лежат в пределах 50-200 микрон,
Общее число ячеек на чипе составляет 103-105, а его линейные размеры составляют приблизительно 1 см.
Слайд 11Чаще всего для изготовления чипов служат пластинки из стекла, пластика, полупроводника
или металла, на которые наносят биологические макромолекулы (ДНК, белки, ферменты), способные избирательно связывать вещества, содержащиеся в анализируемом растворе.
Слайд 12В зависимости от того, какие макромолекулы используются, выделяют различные виды биочипов,
ориентированные на разные цели. В настоящее время преобладает производство ДНК-чипов (94 %), т. е. матриц, несущих молекулы ДНК. Оставшиеся 6 % составляют белковые чипы.
Слайд 13В основе принципа работы всех типов биочипов с иммобилизованной ДНК лежит
точное соответствие между прямой и комплементарной ДНК по правилу Уотсона — Крика (А/Т или G/С). Гибридизуемая ДНК обычно заранее нарабатывается в достаточных количествах с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР). Далее в ходе реакции на чипе происходит взаимодействие комплементарных цепей ДНК: одна из них с известной последовательностью нуклеотидов зафиксирована на пластине, а другая одноцепочечная ДНК-мишень, меченная флуоресцентной меткой, наносится на ДНК-чип.
Слайд 14Особенностью российских гелевых биочипов является то, что такие гели удерживают большее
количество пробы, нежели двухмерные, и потому чувствительность отечественных биочипов выше, а следовательно, ниже требования к регистрирующей аппаратуре. Немаловажно и то, что реакции в объемном геле протекают так же, как и в жидкостях, т. е. как в живом организме. Это позволяет получить результат, максимально приближенный к реальности.
Слайд 15ДНК микрочипы применяют с целью практического
использования информации, полученной в результате секвенирования
геномов человека и других живых организмов, а именно для:
идентификации мутаций в генах, связанных с различными заболеваниями;
наблюдений за активностью генов;
диагностики инфекционных заболеваний и определения наиболее эффективного метода терапии;
идентификации генов, важных для продуктивности сельскохозяйственных культур;
скрининга микроорганизмов, как патогенных, так и полезных, например используемых для восстановления зараженных органическими отходами почв.
Слайд 16Чтобы использовать известные последовательности генов и геномных карт, необходимо определить функции
входящих в их состав генов. Без белковых микрочипов эта работа очень трудоемка. Белковые биочипы, несущие молекулы, «чувствительные» к различным низкомолекулярным соединениям, уже в скором будущем позволят определять наличие широкого спектра лекарственных веществ, гормонов, наркотиков, ядов.
Слайд 17Белковые микрочипы предполагается использовать для:
— обнаружения белковых биомаркеров, характерных для различных
заболеваний и даже разных их стадий;
— оценки потенциальной эффективности и токсичности препаратов в доклинических испытаниях;
— измерения различий в синтезе белков отдельными типами клеток; клетками, находящимися на разных стадиях развития; здоровыми и патологически измененными клетками;
— изучения взаимосвязи между структурой и функциями белков;
— оценки экспрессии белков с целью выявления мишеней для новых лекарственных препаратов;
— изучения взаимодействий между белками и другими молекулами.
Слайд 18Применение биочипов.
Биочипы применяют как для исследовательских целей, так и в практической
медицине. Они помогают в поиске и установлении функций различных генов.
Используя биочипы, можно диагностировать не только наследственные заболевания, но и болезни, являющиеся результатом прижизненных мутаций в генетическом коде.
Микрочипы помогают изучать молекулярные механизмы и осуществлять проверку действия различных лекарств, причем показания и противопоказания по применению препаратов можно выявлять на индивидуальном уровне.
Слайд 19Разрабатываются также биочипы для диагностирования различных форм туберкулеза.
Биочипы можно применять
для контроля за некоторыми смертельно опасными бактериями (так, есть биочипы, позво¬ляющие определять возбудителей сибирской язвы, оспы, чу¬мы и бруцеллеза). Российские ученые получили грант Американского центра по контролю заболеваний (CDC) для совместной работы по выявлению штаммов вирусов гриппа.